本产品是用于定量分析黄曲霉毒素M1的酶联免疫试剂盒。试剂盒包含 96 孔所需的材料，包括标准品.需要实验室配备酶标仪。

检测范围:生乳，奶粉。

分析时间: 20 分钟 (不包括样品前处理时间)。

检出限   生乳：25 ng/l    奶粉：250 ng/l

特异性
组分	交叉反应率 %
Aflatoxin M1	100

样品前处理

生乳: 不需样品前处理。
奶粉: 稀释。

1.检测原理   行。将黄曲霉毒素M1标准溶液和样品加入微孔中。在第一次孵育期间，游离的黄曲霉毒素M1分子与抗黄曲霉 毒素M1抗体结合。然后在洗涤步骤中除去任何未结合的物质。用酶耦合物进行第二次孵育，覆盖抗体的所有剩余的游离结合位点。通过添加固定量的生色底物来确定结合的酶活性。在第三次孵育期间，酶将无色色原体转化为蓝色产物。终止液的添加导致颜色从蓝色变为黄色。通过酶标仪在450nm处测量吸光度，溶液颜色的深浅与黄曲霉毒素M1的浓度成反比。

2.提供的试剂

提供的试剂
微孔板： 包被有抗黄曲霉毒素 M1 抗体 96 孔 (12 条 x 8 孔)。 微孔板可独立拆分，单独使用	黄曲霉毒素 M1 标准品: 5 瓶，浓度分别为 0 ng/l；25 ng/l； 50 ng/l；200 ng/l；500 ng/l。
洗涤缓冲液10x: 1 瓶，50ml。	酶耦合物：1瓶。
终止液： 1 瓶，8ml。	发展液: 1瓶，14ml。

3.未提供的试剂及设备

未提供的试剂及设备
样品前处理	实验器材
“牛奶稀释液”	天平 (奶粉)
蒸馏水	20~200 ul 可调微量移液器
	50~300 ul 多通道可调微量移液器 (可选)
	酶标仪

4.使用者注意事项

①该产品仅供体外诊断使用。
②某些试剂含有可能被法规（EC）No 1272/2008 确定为危 险物质的溶液。
小心处理试剂，避免接触皮肤，眼睛和黏膜。

5.处理和存储说明

(1)将试剂盒存储在2 ~ 8℃，不能冷冻。
(2)使用前将所有试剂置于室温下 (2 小时)，注意：达到室温前不要打开微孔板。
(3)将未使用的微孔板放回到装有干燥剂的铝箔袋中。
(4)使用后立即将剩余试剂放回 2 ~ 8℃。
(5)不要使用过期的产品。
(6)不要混合不同批次的试剂。
(7)使用试剂盒内附带的说明书。
(8)不要更改实验流程,特别是:
①不要延长孵育时间
②不要在高于25℃和低于18℃的环境中孵育微孔板
③孵育期间不要振荡微孔板。
(9)使用精确的移液器以及配套枪头。
(10)一旦开始实验，不间断完成所有实验步骤。
(11)ELISA结果的可重复性在很大程度上取决于微孔洗涤的效率和均匀性，应始终遵守说明书所描述的程序。
(12)对每种标准品和样品使用一次性吸头以避免交叉污染。
(13)不要让吸头尖端接触微孔或微孔内部的液体。
(14)在所有孵育期间避免阳光直射。不能使用密封胶带覆盖微孔板。

6.样品制备

6.1. 生乳

挤奶后，牛奶必须在48小时内检测

①将牛奶恢复至室温.
②牛奶样品直接用于实验分析，不需要离心.
③如果样品中的黄曲霉毒素M1含量 ＞400 ng/l, 建议使用“牛奶稀释液”稀释4倍 (1份牛奶样品+3份牛奶稀释液).

6.2. 奶粉

①称取 10 g 奶粉样品溶解到100ml蒸馏水中（建议将水加热至37- 40°C以更好地溶解).
②摇匀直至粉末完全溶解。测试前将牛奶恢复至室温.
③ 稀释因子是 10.

7.分析步骤

(1)预先安排好实验流程，记录每个标准品及样品的位置，将剩余的微孔板放回到装有干燥剂的铝箔袋中并密封
注意: 建议在每次测定中不超过24个孔 (包括标准品).

(2)第一次孵育
①添加 100 μl 标准品/ 样品到每个微孔中.
②轻轻摇动微孔板几秒钟.
③室温下孵育10 分钟.
不要延长第一次孵育时间，也不要使用自动振荡器.

(3)洗板
①孵育结束后倒掉孔中的液体.
②用稀释后的洗涤缓冲液填满微孔，倒掉微孔中的液体. 重复清洗步骤三次.
③将微孔板倒扣在吸水纸上并轻轻敲打，清除残留的液滴.
不要让微孔变干.

(4)第二次孵育
①添加100μl 酶耦合物到每个微孔中.
②轻轻振荡微孔板几秒钟.
③室温孵育5分钟.
不要延长第二步的孵育时间，不要使用自动振荡器.

(5)洗板，重复步骤3

(6)发展
①添加100 μl 发展液到每个微孔中，彻底混合几秒钟.
②室温孵育5分钟.

(7)添加 50 μl 终止液到每个微孔中，轻轻振荡微孔板.

(8)在 450 nm处读取吸光度值. 在 15 分钟内读数.

8.结果计算

将每种标准品和样品的吸光度值除以标准品0（B0）的吸光度，然后乘以100; 因此，标准0等于100％，所有吸光度值表示为百分比:

(1)在半对数坐标中输入为每个标准品计算的B / Bo值，并绘制标准曲线.
(2)将每个样品的B / Bo值插入校准曲线中得到相应浓度. 用于计算样品中黄曲霉毒素M1的稀释因子是:
①生乳: 1
②奶粉: 10.
(3)如果生乳样品进一步稀释四倍，则将校准曲线上读取的结果乘以稀释因子4.

9.标准曲线示例

10.结果评估

在结果出具之后，有必要验证测定性能。通过将获得的数据与试剂盒中给出的数据进行比较来执行验证。如果值超出给定的数据，建议检查试剂盒的失效日期，吸光度记录的波长以及所用的程序。如果没有出现操作错误，请联系我们的技术支持.

11.试剂盒参数

11.1.分析参数

Bo 吸光度值	≥ 0.7 OD450nm
B/Bo 50%	65-135 ng/l

12.责任

使用试剂盒评估为阳性的样品必须用确认方法重新测试。对由于不正确使用该试剂盒而导致的任何客户损失以及因结果而采取的任何行动不承担任何责任。

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